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細(xì)胞傳代時(shí)間經(jīng)驗(yàn)技巧

養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴們都知道，細(xì)胞一定要傳代，因?yàn)榧?xì)胞在培養(yǎng)過程中不斷的繁殖，數(shù)量也隨之增加，然而培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶的空間有限，增殖受到抑制，所以必須將一部分細(xì)胞移至別的培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶，讓細(xì)胞有足夠生長空間。細(xì)胞傳代也不僅僅是為細(xì)胞安一個(gè)更大的“家”，更重要的，是使細(xì)胞系或細(xì)胞株進(jìn)一步增殖，這樣，我們才能有足夠的細(xì)胞做各種各樣的實(shí)驗(yàn)。但是，對(duì)于傳代的時(shí)間，很多小伙伴都掌握不好，因?yàn)閷?duì)于不同的細(xì)胞來說，判斷能否開始傳代的標(biāo)準(zhǔn)略有不同，今天，我們就主要來聊一下，細(xì)胞傳代的時(shí)間問題。什么時(shí)候...

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如何避免胎牛血清沉淀物的產(chǎn)生

胎牛血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？①纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm，可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)，它們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。關(guān)于細(xì)胞生長，我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。那...

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細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號(hào)PB180436；2、制備好的細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，計(jì)算總細(xì)胞量；3、細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉(zhuǎn)速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個(gè)凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...

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原代細(xì)胞的取材和分離方法

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)的步驟一般是：取材→分離→培養(yǎng)和維持，今天我們重點(diǎn)介紹原代細(xì)胞的取材和分離方法。一、取材人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應(yīng)嚴(yán)格無菌③防止機(jī)械損傷④去除無用組織和避免干燥⑤應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...

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原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟

細(xì)胞一般儲(chǔ)存在液氮中,溫度達(dá)196°C,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zuida限度的保存細(xì)胞活力。細(xì)胞復(fù)蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細(xì)胞恢復(fù)到一般的生長狀態(tài),今天我們來看看原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟。一、檢查收到細(xì)胞株包裹時(shí),請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請(qǐng)立即處理告訴寄方。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷凍細(xì)胞解凍1、依據(jù)細(xì)胞株說明書zhiding的基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清...

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原代細(xì)胞傳代方法哪有幾種?

原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。-般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞I程等問題的研究。那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng),我們應(yīng)該怎么做呢?一般有以下兩種方法:一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與ED...

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